最新公告:欢迎光临华纳国际官方网站
新闻动态

地址:缅甸果敢自治区老街市

电话:199-8839-6665

传真:

手机:199-8839-6665

邮箱:

新冠肺炎核酸检测假阴性率为何这么高

文章来源:未知 更新时间:2020-02-26 11:09

  华纳国际开户报道:新冠肺炎疫情发作以来,关于核酸检测假阴性率过高的话题,一直是各方重视的焦点。有报导称,以荧光定量RT-PCR作为检测手法的新冠病毒检测的阳性率目前仅有30%—50%,导致奇高的假阴性率。
 
  导致假阴性率发作的原因许多。2月22日,南京大学模式动物研讨所发育生物学与遗传学教授赵庆顺接受科技日报记者独家采访时指出,根据有关组织发布的攻略,核酸检测前需将收集到的样品进行56℃灭活,这极有或许使新冠病毒核酸被降解,然后导致不能被正常检出,终究提高了假阴性率。该研讨成果《病毒核酸提取前的高温灭活过程显著下降可检出病毒核酸模板量》,已在中国科学院科技论文平台预发布。
 
  56℃灭活或许导致病毒核酸被降解
 
  2019新式冠状病毒的遗传物质是单链RNA。因而,科研人员的方针是在患者身上找到新冠病毒的RNA。这也是临床确诊金标准。
 
  目前,临床检测主要选用荧光定量RT-PCR试剂盒检测。该办法是将标本中的特定RNA序列逆转录后进行扩增,经过30次以上扩增后,病毒基因片段到达必定数量即可进行可视检测。
 
  “理论上,哪怕模板只要1个病毒,就有或许被检测出来。”赵庆顺说,科研实践中,在模板(病毒)量大于100个的情况下,扩增成果就会十分稳定。
 
  但是,赵庆顺在网络上看到一个教育视频,不由心生疑虑。该视频由北京协和医院和北京市卫健委联合制造。视频3分08秒至3分40秒显现:在制备核酸模板前,需将收集到的样品在56℃条件下进行30分钟病毒灭活。
 
  记者在中华医学会查验医学分会发布的《2019新式冠状病毒肺炎临床实验室检测的生物安全防护攻略(试行第一版)》中也看到:核酸扩增前,可以对标本先行消毒。包含56℃孵育30分钟,加蛋白酶K。
 
  中华医学会查验医学分会发布的《新式冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家一致》中,明确指出需将样品56℃孵育至少45分钟或更高温度进行灭活。
 
  记者经过采访确认,绝大多数查验医师均按照上述规范,进行56℃条件下时刻不等的病毒灭活,然后才制备核酸模板。
 
  这样做带来的问题是,病毒RNA极易被核糖核酸酶降解,因为这种酶在60℃时活性最高。核糖核酸酶来自两方面,一是样本细胞内,二是收集、保存、运送过程中的外来污染物。
 
  进行灭活处理是出于生物安全的考虑
 
  “进行灭活处理是出于生物安全的考虑,维护从事检测的工作人员不被病毒感染。”赵庆顺说。
 
  正是出于这方面的考虑,国家卫健委发布的相关文件中,明确要求对标本进行灭活处理。
 
  北京协和医院制造的教育视频以及中华医学会查验医学分会发布的《防护攻略》和《专家一致》,根据正是来自国家卫健委相关文件,包含《新式冠状病毒实验室生物安全攻略(第二版)》《新式冠状病毒肺炎实验室检测技能攻略(第三版)》等。
 
  但是,记者查询了国家卫健委相关文件,其关于病毒灭活的具体办法并未做出明确规定,只是笼统地要求:感染性材料或活病毒在选用牢靠的办法灭活后进行的核酸检测。
 
  赵庆顺进一步查阅了美国疾控中心、香港大学公共卫生学院以及华大基因发布的核酸检测说明,也未发现56℃灭活这一步骤。
 
  病毒核酸降解对检测成果影响究竟有多大
 
  记者在采访中发现,不同人士对这个问题的回答爱憎分明:
 
  来自疾控部门、中国医学会查验医学分会、相关医院查验医师的看法是,不会对检测成果有太大的影响。而赵庆顺等专家认为,核酸提取前对人体样品进行高温杀毒处理,或许是导致新冠病毒核酸检出假阴性率过高的重要原因之一。
 
  赵庆顺以猪流行性腹泻病毒(一种冠状病毒,来自活疫苗)为模型展开了高温灭活对病毒可检出量影响的研讨,成果表明:保存在普通等渗溶液(Hank’s液)中的样品经56℃孵育30分钟,导致样品中可检出的冠状病毒模板削减一半,如果以92℃孵育5分钟,则可检出的冠状病毒模板损失96%以上。
 
  “理论上,不扫除新冠病毒的方针RNA片段在56℃以上高温灭活中不易被降解的或许。”赵庆顺坦言,“但我宁愿自己的判别是错的,也不期望因为某个细节考虑不周而导致检测成果出现假阴性。”
 
  别的,不同品牌的样品保存液,也会对检测成果发生较大影响。赵庆顺在实验中发现,在56℃30分钟条件下,选用南京诺唯赞研发的R503保存液存放猪流行性腹泻病毒样品时,病毒核酸的可检出量是对照组(Hank’s液)检出量的3倍;而如果是92℃5分钟灭活,则检出量是对照组的42倍。
 
  中华医学会查验医学分会主任委员王成彬教授在撰文回应核酸检测假阴性率较高现象时也指出,不同提取试剂对最终提取到的核酸数量和质量或许存在差别,然后直接影响检测成果。他建议,关于某些高度疑似病例,或检测成果难以确定的病例,建议用2种以上试剂进行检测、验证。
 
  “假阴性意味着漏检,不只会导致临床中对疑似患者不能快速确诊,而且会使漏检者成为潜在的病毒传染源。”赵庆顺为此提出建议,一是尽量运用无核糖核酸酶污染的样本收集管,二是将标本放置在可维护病毒核酸免受高温灭活损坏的样品保存液中,然后保证样品RNA从保存、运送到高温灭活等得到全程维护,尽最大或许保证用于临床检测的核酸质量,削减病毒核酸可检出模板在核酸提取前的人为损坏。

地址:缅甸果敢自治区老街市电话:199-8839-6665传真:

版权所有:Copyright © 2002-2019 华纳国际 版权所有 支持:华纳国际ICP备案编号: